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匯百試劑IPTG 【367-93-1】 科研用途介紹

大家都知道IPTG【CAS:367-93-1】在生物實(shí)驗(yàn)室的用途非常廣泛,那么這個(gè)在生化研究領(lǐng)域,這個(gè)人人知曉的IPTG到底有哪些用途呢?下面小編為大家介紹下吧!
1.IPTG主要用作誘導(dǎo)劑,誘導(dǎo)蛋白表達(dá),誘導(dǎo)乳糖操縱子表達(dá)。
2.IPTG通常和X-GAL【CAS:7240-90-6】一起搭配使用,用于藍(lán)白菌落的篩選。
3.IPTG也用在發(fā)酵提取,細(xì)胞培養(yǎng)中。
4.IPTG還可以用在疫苗研發(fā)、大腸桿菌表達(dá)目標(biāo)蛋白、細(xì)胞重組表達(dá)等研究中。
IPTG誘導(dǎo)原理
首先
E. coli的乳糖操縱子(元)含Z、Y及A三個(gè)結(jié)構(gòu)基因,分別編碼半乳糖苷酶、滲透酶和乙酰基轉(zhuǎn)移酶,此外還有一個(gè)操縱序列O、一個(gè)啟動(dòng)序列P及一個(gè)調(diào)節(jié) 基因I。I基因編碼一種阻遏蛋白,后者與O序列結(jié)合,使操縱子(元)受阻遏而處于關(guān)閉狀態(tài)。在啟動(dòng)序列P上游還有一個(gè)分解(代謝)物基因激 活蛋白(CAP)結(jié)合位點(diǎn)。由P序列、O序列和CAP結(jié)合位點(diǎn)共同構(gòu)成lac操縱子的調(diào)控區(qū),三個(gè)酶的編碼基因即由同一調(diào)控區(qū)調(diào)節(jié),實(shí)現(xiàn)基因產(chǎn)物的協(xié)調(diào)表達(dá) 。
其次
在沒有乳糖存在時(shí),lac操縱子(元)處于阻遏狀態(tài)。此時(shí),I序列在PI啟動(dòng)序列操縱下表達(dá)的Lac阻遏蛋白與O序列結(jié)合,阻礙RNA聚合酶與P序列結(jié)合,抑制轉(zhuǎn)錄啟動(dòng)。當(dāng)有乳糖存在時(shí),lac操縱子(元)即可被誘導(dǎo)。在這個(gè)操縱子(元)體系中,真正的誘導(dǎo)劑并非乳糖本身。乳糖進(jìn)入細(xì)胞,經(jīng)β-半乳糖苷酶催化,轉(zhuǎn)變?yōu)楫惾樘恰:笳咦鳛橐环N誘導(dǎo)劑分子結(jié)合阻遏蛋白,使蛋白構(gòu)象變化,導(dǎo)致阻遏蛋白與O序列解離、發(fā)生轉(zhuǎn)錄。異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)的作用與異乳糖相同,是一 種作用極強(qiáng)的誘導(dǎo)劑,不被細(xì)菌代謝而十分穩(wěn)定,因此被實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用。
 
使用方法
首先把IPTG配制成23.83 mg/ml(100 mM)的水溶液,并進(jìn)行過濾除菌后保存。然后在100 ml的瓊脂培養(yǎng)基中,加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal(20 mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100 μl的Amp(100 mg/ml),制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培養(yǎng)基。當(dāng)DNA片段插入至pUC系列載體(或其他帶有l(wèi)acZ、Amp基因載體),然后轉(zhuǎn)化至lacZ缺失細(xì)胞中后,涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培養(yǎng)基,可根據(jù)長(zhǎng)出菌體的藍(lán)白色,而方便地挑選出基因重組體(白色為具有DNA插入片段的基因重組體)。
 
作用
誘導(dǎo)外源基因的表達(dá),普遍應(yīng)用于原核表達(dá)系統(tǒng),使其表達(dá)量增高,產(chǎn)物穩(wěn)定,具有易鑒定,易純化的優(yōu)點(diǎn)。
 
匯百試劑作為國(guó)內(nèi)大型糖苷系列產(chǎn)品生產(chǎn)商,向廣大科研單位供應(yīng)純度99%~101%的高純度IPTG。經(jīng)多次會(huì)議商討改良,匯百試劑目前完成IPTG【367-93-1】進(jìn)一步技術(shù)純化。目前匯百試劑IPTG擁有工業(yè)級(jí),試劑級(jí),醫(yī)用級(jí)三個(gè)級(jí)別。
 
另外,我司常用生物試劑還有:碘代乙酰胺,X-GAL,PMSF, MOPS,鹽酸胍,蛋白酶k,G-418硫酸鹽等,產(chǎn)品種類幾千種,并代理國(guó)內(nèi)多家知名試劑品牌,歡迎新老顧客前來訂購(gòu)。
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