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生化實(shí)驗(yàn)中各種MOPS緩沖溶液的配方


在生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)中,緩沖液配方是實(shí)驗(yàn)的重中之重,真正可靠的配方可以改變實(shí)驗(yàn)的命運(yùn)。MOPS,適用于葉綠體薄層備樣的電子傳遞和磷酸化研究;可以配制成多種瓊脂培養(yǎng)基,在極限培養(yǎng)基中作為無毒緩沖液應(yīng)用于棒狀鏈霉菌的培養(yǎng)和頭孢菌素的生產(chǎn);可作為二維凝膠電泳中等電聚焦電泳(IEF)的電解質(zhì)系統(tǒng)成分;還可應(yīng)用于Northern雜交,作為RNA的分離和轉(zhuǎn)膜時(shí)的緩沖液。如此重要的緩沖液,配方是什么?本文總結(jié)了幾乎所有MOPS緩沖液的配方供您參考。
 
(1)MOPS Buffer (10×)
試劑 質(zhì)量(1 L) 終濃度
超純MOPS 41.86 g (or 46.26 g鈉鹽) 0.2 M
無水醋酸鈉 4.1g(或6.8g 三水合醋酸鈉) 0.05 M
Na2EDTA (0.5M, pH 7.5) 20 mL 0.01 M
注意事項(xiàng):
用NaOH將pH調(diào)至7.0(如果使用MOPS鈉鹽,則使用冰醋酸調(diào)節(jié)pH);
不需要高壓滅菌;
在室溫下避光儲(chǔ)存,用鋁箔覆蓋。
 
(2)MOPS buffer (5X)
試劑 質(zhì)量 (100 mL) 終濃度 (5X)
MgSO4 0.1204 g 10 mM
MOPS 10.463 g 0.5 M
NaCl 14.61 g 2.5 M
將上述試劑溶解在50mL H2O中,用NaOH調(diào)節(jié)pH至7.5,定容至100mL。過濾消毒,避光儲(chǔ)存。
 
(3)MOPS salts
試劑 MOPS Tricine FeSO4?7H2O NH4Cl K2SO4 CaCl2?2H2O MgCl2
NaCl
含量 400mM 40mM 0.1mM 95mM 2.8mM 5μM 5.3mM 0.5M 
上述試劑配制的溶液最終體積為1L,過濾滅菌。
 
(4)MOPS-EGTA buffer
試劑 質(zhì)量(for 1 L) 終濃度
MOPS 20.9 g 0.1 M
MgSO4 0.24 g 2 mM
EGTA 0.38 g 1 mM
NaCl 29.2 g 0.5 M 
將上述試劑溶解在800mL DEPC處理的水中,用NaOH調(diào)節(jié)pH至7.5,然后加入定容至為1L。使用0.22μm過濾器對(duì)緩沖液進(jìn)行過濾滅菌。
 
(5)MOPS 電泳緩沖液
0.2M MOPS(pH 7.0),20mM乙酸鈉,10mM EDTA(pH 8.0)。
10x溶液:將41.8g MOPS溶解在700mL DEPC處理過的水中,用2N NaOH調(diào)節(jié)pH至7.0。加入20mL DEPC處理的1M乙酸鈉和20Ml DEPC處理的0.5M EDTA(pH8.0),定容至1升。過濾滅菌,室溫避光保存。
 
(6)PFA-MOPS-EGTA fixation buffer
試劑 質(zhì)量(50 mL) 終濃度
多聚甲醛 2 g 4% (w/v)
NaOH (1 N) 5 mL /
HCl (1 N) 5 mL /
MOPS-EGTA 50 mL /
 
將2g多聚甲醛加入5mL的1N NaOH中,加熱至60°C溶解。加入5mL 1N HCl和35mL MOPS-EGTA緩沖液。4°C下保存。
希望這些配方可以幫助您在實(shí)驗(yàn)中取得成功。

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